總糖實驗報告範本
糖在我們日常生活中隨處可見，我們吃的米飯、水果、零食中或多或少都含有一些糖類。同時，糖也是我們維持機體運動所必不可少的物質，沒有了它，就沒有了能量的來源。我們這次便走進實驗室探索糖類的奧秘。本次實驗我們將用3,5—二硝基水楊酸法測定總糖和還原糖中的含糖量。本次實驗中，我們除了要掌握還原糖和總糖的測定基本原理還要學習比色法測定還原糖的操作方法以及分光度法測定的原理和方法。
首先，讓我們一起來了解一下它們的測定方法吧。還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和澱粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計）。還原糖在鹼性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定範圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關係，利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線並計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由於多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以0.9。
一、實驗目的
1、掌握還原糖和總糖的測定的基本原理
2、學習比色法測定還原糖的操作方法 3、學習分光光度法測定的原理和方法
二、實驗原理
還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基
的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和澱粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計）。
還原糖在鹼性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定範圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關係，利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線並計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由於多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以0.9。
三、材料與器具的準備。
實驗材料：麵粉。 實驗試劑
（1）、1mg/mL葡萄糖標準液
準確稱取80℃烘至恆重的分析純葡萄糖100mg，置於小燒杯中，加少量蒸餾水溶解後，轉移到100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL，混勻，4℃冰箱中儲存備用。
（2）、3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑
將6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸鉀鈉的.熱水溶液中，再加5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻後加蒸餾水定容至1000mL，貯於棕色瓶中備用。
（3）、碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶於100mL蒸餾水中。 （4）、酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶於250mL 70%乙醇中。 （5）、6M HCl和6M NaOH各100mL。 實驗器材
（1）具塞玻璃刻度試管：20mL×11（2）大離心管：50mL×2
（3）燒杯：100mL×1 （4）三角瓶：100mL×1 （5）容量瓶：100mL×3
（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1 （7）恆溫水浴鍋 （8）沸水浴 （9）分光光度計
分光光度計的基本原理是溶液中的物質在光的照射下，產生了對光吸收的效應，物質對光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質都具有其各自的吸收光譜，因此當某單色光透過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質的濃度有一定的比例關係，也即符合比色原理——Lambert-Beer's law:
數學表示式:
A=lg(1/T)=KCL
A為吸光度T為透射率,是投射光強度比上入射光強度
C為吸光物質的濃度 L為吸收層厚度 K為吸收係數 物理意義是當一束平行單色光垂直透過某一均勻非散射的西光物質時,其吸光度A與吸光物質的濃度C及吸收層厚度L成正比.
四、實驗步驟。
器材與材料準備完畢之後，便開始按照以下步驟進行實驗。首先，製作葡萄糖標準曲線。取6支20mL 具塞刻度試管編號，按下表分別加入濃度為1mg/mL 的葡萄糖標準液、蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑，配成不同葡萄糖含量的反應液。
接下來，提取還原糖。準確稱取2.00g 食用麵粉，放入100mL 燒杯中，先用少量蒸餾水調成糊狀，然後加入50mL 蒸餾水，攪勻，置於50℃恆溫水浴中
保溫20min，使還原糖浸出。過濾，將濾液收集在100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。
緊接著，提取總糖。準確稱取1.00g食用麵粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸餾水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加熱水解30min（水解是否完全可用碘-碘化鉀溶液檢查）。待三角瓶中的水解液冷卻後，加入1 滴酚酞指示劑，用6mol/LNaOH 中和至微紅色，用蒸餾水定容在100mL容量瓶中，混勻。將定容後的水解液過濾，取濾液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混勻，作為總糖待測液。
然後，取4支20mL 具塞刻度試管，編號，6、7、8、9，按下表所示分別加入待測液和顯色劑。
最後，用分光光度計進行比色。先將機器開啟預熱20分鐘。選擇540nm的波長。再按MODE鍵切換到T，將黑體放入光路中，合上蓋，0鍵校零。再按MODE鍵切換到A，將倒入比色皿中的0號液體放入到光路中，合上蓋，100鍵校零。再將倒入比色皿中的各號液體放入到光路中即可測得光密度值。